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一体式超声波破碎仪对大肠杆菌实验的帮助

发布时间:2021-11-19浏览:12次
   一体式超声波破碎仪用于多种动植物、病毒、细胞、细菌及组织的破碎,同时可用来乳化、分离、匀化、提取、消泡、清晰、纳米材料的制备、分散及加速化学反应等。该设备被广泛用于生物学、微生物学、物理学、动物学、农学、制药、化工、污水处理、纳米材料等领域,也可用于产生波提取、超声波材料制备、超声波萃取、超声波乳化等。
  破碎大肠杆菌用于提取表达外源蛋白,在使用一体式超声波破碎仪之前,用PBS悬浮,然后再破碎效果较好,其作用还是很明显的,对其他的一些细菌同样起作用,比如链霉菌。
  细菌沉淀直接加样品1 buffer,再加5μl的巯基乙醇,混匀,离心,煮沸10min,直接上样,染色脱色步骤:
  将胶放入适量的染色液微波炉里加热1min(下次适当补点醋酸即可),将染色液换成大量的水(自来水即可)在微波炉煮10min就可以。在表达重组蛋白后用超声波破碎细胞,采用冰浴,400w,破2s停1s,但是不一会就产生大量泡沫,影响了破碎功率,pbs和tris缓冲液都是这样,最后都是破碎不完全,而蛋白就在这些未破碎的细胞中。
  相关问题探讨:
  1.试验中产生气泡:因为探头位置没放好。超声波破碎仪探头一定要接近底部约1cm。功率根据仪器不同会有所不同,但可通过观察液面,有波动但不要太剧烈就好。
  2.破3s停10s,破碎20-30个循环观察效果。
  3.探头位置摆放要注意,听声音如果不对的话就要及时调整。另外可从菌浓度方面考虑。在使用超声波破碎时试着加大体积,振幅最好不要超过60%。
  4.尝试超8s停8s,对有些菌体蛋白来说,通常方法很难散热,导致蛋白变性产生气泡,可停顿时间稍长一些,这种情况多见于包涵体形式的蛋白。如果换用一体式超声波破碎仪来进行工作,由于热耗较小,停顿周期可适当减小。