非接触破碎仪实验时遇到的常见问题说明

　　探头振动形成数百万个微气泡(空穴)，微气泡不断膨胀并发生剧烈爆破。这种称为空穴现象的现象可以在探头尖部产生强力的剪切作用，从而引起液体中分子强烈振动。

　　非接触破碎仪超声探头由钛合金制成，可以作为一个机械变量器来提高由转换器所产生的振动的振幅。探头直径越大，可以处理的样品量则越多，但是超声波强度会相应降低。当处理体积更多，粘度更大的样品，或在高压条件下工作时，需要使用更大功率的破碎仪。当处理含有机溶剂的样品或低表面张力的液体时，通常使用一体式探头，不建议使用探头尖可更换的探头。所有探头均可进行高温高压灭菌。

　　非接触破碎仪试验时的常见疑问解析：

　　链霉菌超声破碎的方法条件是什么？

　　一般前处理就是配置成一定浓度的菌悬液，使用非接触破碎仪进行超声破碎。这时采用的具体条件如下：

　　1.取细菌的24 h培养液于5 000 r/min下离心5 min收集菌体；

　　2.用pH 7．5的Na2HPO-NaH2PO缓冲液洗涤3次，再用该缓冲液将菌体配成1：3的菌悬液．置于40 mL大塑料试管内；

　　3.将大塑料试管置于冰浴中，采用超声波破碎(功率200 W，1/2”探头，破碎30 s，间歇30 s)；

　　4.破碎液于12 000 r/min下高速冷冻离心30 min，收集细胞碎片和上清液，超声破菌流程与上述基本一致，就是洗涤菌体也可以用预冷的生理盐水或pH8的Tris－HCl，洗涤一次就可以。另外超声剂量随样品量、菌体改变比较大，功率可以到400－600w，超5s，停5s，冰浴，要加终浓度1 mM的PMSF。为确定合适的超声强度和次数，有必要随时镜检观察菌体是否*破碎。放线菌属于原核生物系统进化树上的(G＋C)摩尔百分含量(mol％)高的革兰氏阳性菌分枝类群。在做大肠杆菌超声时，采用的是400W非接触破碎仪，超5停5的方法效果不错，但是用在链霉菌上似乎没什么效果，这是因为大肠杆菌式属于革兰氏阴性菌的。